所有應用于人類臨床的醫(yī)學解決方案，在研發(fā)和測試階段都離不開動物實驗研究。在生物制品的生物安全研究中，動物實驗也是其中不可或缺的重要部分。可是，如果生物安全檢定動物體內(nèi)實驗發(fā)生變更應該怎么辦呢？本期技術共探，我們將帶來硬核知識分享！

—— 生物制品外源因子檢測要求:動物體內(nèi)接種實驗

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2020年《生物制品注冊受理審查指南（第二部分 治療用生物制品）（試行）》²中3.2.A.2規(guī)定，注冊申報需要提交“外源性物質(zhì)的安全性評估資料”，評估資料包括風險評估資料、病毒清除驗證研究資料、檢測項目與報告、檢測方法與驗證等資料。對于生物制品的外源因子檢測方法要求，可以參考2023年《ICHQ5A (R2)來源于人或動物細胞系生物技術產(chǎn)品的病毒安全性評價》⁷的指南要求。其中，動物體內(nèi)接種實驗是外源病毒因子檢測不可或缺的重要部分。

—— 中美雙報細胞庫檢定：動物體內(nèi)接種實驗要求

圖源?| FDA官網(wǎng)

細胞庫作為生物制品表達系統(tǒng)的關鍵起始原料，對其外源病毒因子的全面檢測是各國法規(guī)的共識，包括《中國藥典》2020版三部生物制品生產(chǎn)檢定用動物細胞基質(zhì)制備及質(zhì)量控制¹、USP General Tests and Assays: <1237> Virology Test Methods⁶以及中國食品藥品檢定研究院等發(fā)表的《基因治療產(chǎn)品質(zhì)量控制概述》⁵等。

—— 動物體內(nèi)接種實驗：外源病毒因子檢測與藥物安全性評價

ICHQ5A的附件Table 2⁷非常清晰地向我們展示了病毒的不同檢測方法的優(yōu)點和局限性，包括體內(nèi)動物接種、體外細胞共培養(yǎng)、抗體生產(chǎn)實驗、透射電鏡檢測、qPCR核酸檢測以及逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測等。

雖然動物體內(nèi)接種能夠敏感識別活病毒，但是同時對于病毒檢測種類是有限的，可能會形成干擾。在實際實驗過程中，實驗動物的篩選、飼養(yǎng)環(huán)境、人員操作、實驗操作等都可能會造成實驗結(jié)果的偏差。

外源病毒因子動物體內(nèi)接種實驗常見的問題如下表2所示，從而指向樣品的陽性結(jié)果。

表2

動物實驗的影響因素較多，所以在實驗設計、動物篩選、實驗操作、飼養(yǎng)管理、人員培訓等方面都需要全面質(zhì)控，以降低系統(tǒng)性的累計誤差。

動物實驗不只是在外源病毒因子的檢查方面，對于非臨床的動物模型、藥理毒理安全評價、藥效概念驗證等更加重要。2022年6月CDE發(fā)布《基于動物法則的藥物注冊技術指導原則（征求意見稿）》⁴，以促進藥物研究中動物實驗的規(guī)范性，從而產(chǎn)生更加客觀真實的研究結(jié)果，更好地指導臨床實驗。

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—— 生物制品外源因子檢定與藥物生產(chǎn)工藝變更：動物體內(nèi)接種實驗變更管理

動物實驗是指示藥物安全性如外源因子的檢測方法，同時也是指示藥物有效性如效價測定的檢測方法。對于動物實驗的變更，一直是法規(guī)的重點關注對象。如2021年NMPA發(fā)布《已上市生物制品藥學變更研究技術指導原則（試行）》³，其中將藥物活性質(zhì)量控制方面的動物檢測場地變更列為重大變更，需要說明變更理由，詳述變更檢定場地信息，包括名稱（全稱）、地址（具體到廠房/車間）和功能等，并且必須提供支持方法學轉(zhuǎn)移的技術資料。

2023年，F(xiàn)DA也發(fā)布了行業(yè)指南草案《人類細胞和基因治療產(chǎn)品的生產(chǎn)變化和可比性》⁸，對于CGT領域產(chǎn)品的變更評估更加嚴格，特別是符合21CFR第211部分的在研產(chǎn)品和許可產(chǎn)品，需要在嚴格的質(zhì)量體系下進行包括動物模型進行的定量研究，以證明產(chǎn)品具有預期的生物效應，并為變更前和變更后產(chǎn)品的可比生物活性提供支持性證據(jù)。

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來源：FDA《人類細胞和基因治療產(chǎn)品的生產(chǎn)變化和可比性》