1.核酸適配體篩選介紹

適體是單鏈核酸（DNA 或 RNA），可以高親和力和特異性結(jié)合預(yù)定的靶標(biāo)。它們可被定義為“人工抗體”，已廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)基礎(chǔ)研究、臨床診斷和藥物開發(fā)等領(lǐng)域[1]。

SELEX 是一種體外方法，廣泛用于從隨機(jī)單鏈核酸序列文庫中選擇與目標(biāo)配體特異性結(jié)合的單鏈 DNA 或 RNA（也稱為適體）的寡核苷酸[2]。

2.核酸適配體篩選原理

SELEX 技術(shù)是體外篩選核酸適配體的基本方法，它擺脫了對生物系統(tǒng)的依賴性完全是一種體外進(jìn)行的組合化學(xué)方法。雖然通過SELEX 技術(shù)篩選出來的適配體與不同大小的靶標(biāo)分子作用方式有可能不同，但是其結(jié)合的基本原理相似，都是由于單鏈寡核苷酸堿基之間的相互作用，往往會形成許多空間構(gòu)象，如發(fā)夾、假結(jié)、G-四聚體等，通過空間構(gòu)象匹配、序列中堿基的堆積作用、帶電基團(tuán)之間的靜電作用或氫鍵作用等，從而實(shí)現(xiàn)適配體與靶分子之間的高親和力、高特異性結(jié)合[3]。

圖1：核酸適配體與大分子靶標(biāo)相互作用示意圖

SELEX技術(shù)的基本流程主要包括：1）體外化學(xué)合成單鏈寡核苷酸文庫；2) 將隨機(jī)化文庫與目標(biāo)配體混合以允許寡核苷酸-目標(biāo)結(jié)合；3) 洗去未與目標(biāo)配體結(jié)合的核酸分子；4) 洗脫結(jié)合的適體；5) 通過 PCR 方法擴(kuò)增結(jié)合的適體以生成二級文庫用于下一輪篩選；6）重復(fù)步驟(2)-(5)，獲得與目標(biāo)配體具有高親和力和高特異性的適配體?？返律锾峁┑倪m體體外篩選技術(shù)，在對蛋白質(zhì)（細(xì)胞，小分子多肽）的適體篩選的實(shí)驗(yàn)中，能快速篩選出候選靶分子。

利用SELEX法，卡梅德生物的科學(xué)家為客戶提供適體體外篩選服務(wù)，如：蛋白質(zhì)的適體篩選（細(xì)胞的適體篩選等），客戶只需提供靶標(biāo)蛋白或相關(guān)序列或序列號，卡梅德生物將對靶標(biāo)蛋白進(jìn)行SDS-PAGE檢測，之后進(jìn)行蛋白文庫的制作與靶蛋白篩選，然后解離篩選的適配體，重復(fù)洗脫篩選，經(jīng)PCR，NGS測序，最后合成適配體?？返律镆矠榭蛻籼峁┮徽臼椒?wù)，從基因分析合成---蛋白表達(dá)純化--適體體外篩選，為客戶的實(shí)驗(yàn)提供有力的支撐。

參考文獻(xiàn)

[1] Wei H, Li B, Li J, et al. DNAzyme-based colorimetric sensing of lead (Pb2+) using unmodified gold nanoparticle probes[J]. Nanotechnology, 2008, 19(9): 095501.

[2] Zein M I H L, Hardianto A, Irkham I, et al. Recent development of electrochemical and optical aptasensors for detection of antibiotics in food monitoring applications[J]. Journal of Food Composition and Analysis, 2023, 124: 105644.

[3] Li L, Ma R, Wang W, et al. Group-targeting aptamers and aptasensors for simultaneous identification of multiple targets in foods[J]. TrAC Trends in Analytical Chemistry, 2023, 166: 117169.